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GB/T 17813-1999 复合预混料中烟酸、叶酸的测定高效液相色谱法



 
GB/T 17813-1999复合预混料中烟酸、叶酸的测定高效液相色谱法
 
1 简介
本标准规定了复合预混料中烟酸、叶酸的测定—高效液相色谱法
本标准适用于复合预混料和维生素预混料中烟酸、叶酸的测定。测量范围为每千克样品中含烟酸的量在1000mg以上,含叶酸的量在500mg以上。
2 引用标准
下列标准中所包含的条文,通过在本标准中引用而构成为本标准的条文本标准出版时,所示版本均为有效。所有标准都会被修订,使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。
GB/T 6682-1992分析实验室用水规格和试验方法
3 方法原理
试样中的烟酸、叶酸用水一甲醇一乙酸混合溶液提取,将滤液注人高效液相色谱反相柱上进行分离,用紫外检测器在28 nm波长处定量测定。
4 试剂和材料
除特殊注明外,本标准所用试剂均为分析纯.水为蒸馏水,色谱用水为去离子水,符合GB/T 6 682的规定
4.1 甲醇:优级纯。
4.2 三乙胺
4.3 冰乙酸。
4.4 烷磺酸钠(PICB6):c ( CH3( CH2)5S03Na)= 0.005mol/l{或p( CH3( CH2)5SO3Na)
=941mg/l)。
4.5 标准溶液配制
4.5.1 烟酸标准贮备液:称取经过干燥的烟酸标准纯品25.0mg,置于250ml,棕色容量瓶中,用移动相溶解,稀释至刻度,于冰箱保存,可放置一周。
4.5. 2 叶酸标准贮备液:称取经过干燥的叶酸标准纯品25.0mg,置于250ml容量瓶中,用碳酸钠溶液(4.8) 溶解,调至pH7.0定容至刻度,于冰箱保存。
4.5. 3 烟酸、叶酸标准工作液准确吸取4.5. 1和4.5.2各10ML,用移动相稀释至50ml或100M L该混合标准溶液置于带盖小瓶贮存,供液相色谱仪分析用,当日使用。
4.6 提取液:取500mL去离子水,加10mL冰乙酸(4.3),1.3ml三乙胺(4.2),用去离子水定容至
1l,此时pH为3.2,过0.45um滤膜,取上述溶液850m L与150m L甲醇(4.1)混合
4.7 磷酸缓冲液:称取4.84g的磷酸氢二钾(K2HP04),9.82g磷酸二氢钾(KH2P04),溶于去离子水中,加20ml乙腊,用去离子水定容至1L,混匀用2000氢氧化钾调节pH至6.5
4.8 碳酸钠溶液:c(Na2CO3)=0.1mol/L.
5 仪器、设备
5.1 实验室常用仪器设备
5.2 超声波水浴
5.3 超纯水装置(Millipore或全磨口玻璃蒸馏器)
5.4 离心机:3000r/min
6 试样制备
选取有代表性的样品至少500g,四分法缩减至100g,磨碎,全部通过0.28m m孔筛,混匀,装入密闭容器中,避光低温保存备用。
7 分析步骇
7.1 试验溶液的制备
称取试样维生素预混料0.5- 1g或复合预混料1-5g,精确至0.0001g,置于100mL棕色容量
瓶中,加10mL碳酸钠溶液(4.8),浸湿试样加70mL提取液(4.6)混匀,于超声波水浴上振荡提取15min,用提取液定容至刻度,混合均匀,过滤或离心。再经0.45um过滤膜过滤至带盖小瓶中,调整该试验溶液的浓度≤5ug/mL,供高效液相色谱分析用。
7.2 测定
7.2.1 色谱条件
7.21.1 反相离子对色谱条件
柱长:25cm、内径4.0mm不锈钢柱。
固定相:ODS(C18)粒度5um,
移动相:取500m L去离子水,加10ml冰乙酸,1.3ml三乙胺,一小瓶20ml乙烷磺酸钠(4.4),
用去离子水定容至1L,调节pH为3.2,过0.45um滤膜,取上述溶液850mL与150mL甲醇混合,脱气
流速 :1.0mL/min,
温度 :30℃。
进样量 : 20ul。
检测器 : 紫外检测器,使用波长275nm
7.2.1.2 反相色谱
柱长 :25cm,内径4mm,不锈钢柱。
固定相 : LichrospherCH-8/11.,粒度5um
移动相 : 2%乙睛磷酸缓冲液(4.7)
流速 : 1.4mL/min.
温度 :室温。
进样体积 :20uL.
检测器 : 紫外检测器,使用波长280nm.
7.2.2 定量测定
按高效液相色谱仅说明书调整仪器操作参数和灵敏度(AUFS),色谱峰分离度符合要求用两次以上相应标准工作液对系统进行校正。向色谱柱注入相应的烟酸、叶酸标准工作液(4.5.3Vg1)和试验溶液7.1Vi)得到色谱峰面积响应值(Psi,Pi,用外标法定量测定
 
以上标准GB/T 17813-1999
关键词:高效液相色谱仪,复合饲料烟酸、叶酸,测定 www.htcee.com
 

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